选择性琼脂平板
|
亚属Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ
|
亚属Ⅲ(即亚利桑那菌)
|
亚硫酸铋琼脂
|
产硫化氢的菌落为黑色,有金属光泽,棕褐色或灰色,菌落周围培养基可呈黑色或棕色,有些菌株不产生硫化氢,形成灰绿色的菌落,周围培养基不变
|
黑色有色光泽
|
dhl琼脂
|
无色半透明,产硫化氢菌落中心带黑色或几乎全黑色
|
乳糖迟缓阳性或阴性的菌株与亚属Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ相同;乳糖阳性的菌株为粉红色,中心带黑色
|
he琼脂 ws琼脂
|
蓝绿色或蓝色;多数菌株产硫化氢,菌落中心黑色或几乎全黑色
|
乳糖阳性的菌株为黄色,中心黑色或几乎全黑色;乳糖迟缓阳性或阴性的菌株为蓝绿色或蓝色,中心黑色或几乎全黑色
|
ss琼脂
|
无色半透明;产硫化氢菌株,有的菌落中心带黑色,但不如以上培养基明显
|
乳糖迟缓阳性或阴性的菌株与亚属Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ相同;乳糖阳性的菌株为粉红色,中心黑色,但中心无黑色形成时与大肠埃希氏菌不能区别
|
(二)生化性状
硫化氢 (h2s)
|
靛基质
|
尿素
(ph7.2) |
氰化钾
(kcn) |
赖氨酸脱
羧酶 |
判 定 菌 属
|
+
|
-
|
-
|
-
|
+
|
沙门氏菌属
|
+
|
+
|
-
|
-
|
+
|
沙门氏菌属(少见),爱德华氏菌属
|
+
|
-
|
+
|
+
|
-
|
柠檬酸杆菌属,奇异变形杆菌
|
+
|
+
|
+
|
+
|
-
|
普通变形杆菌
|
-
- |
-
- |
-
- |
-
- |
+
- |
沙门氏菌属,埃希氏首属
甲型副伤寒沙门氏菌,埃希氏菌属,志贺氏菌属 |
-
- |
+
+ |
-
- |
-
- |
+
- |
埃希氏菌属
埃希氏菌属,志贺氏菌属 |
-
- |
-
- |
+/- +
|
+
+ |
+
- |
克雷伯民族各属
阴沟肠杆菌柠檬酸杆菌量 |
-
|
+
|
+/-
|
+
|
-
|
莫尔根氏菌量,普罗菲登斯菌属
|
尿素
(ph7.2) |
氰化钾
(kcn) |
赖氨酸
|
判 定 结 果
|
-
- + |
-
+ - |
-
+ + |
甲型副伤寒沙门氏菌(要求血清学鉴定结果) 沙门氏菌Ⅳ或Ⅴ(要求符合本群生化特性) 沙门氏菌个别变种(要求血清学鉴定结果) |
甘露醇
|
山梨醇
|
判 定 结 果
|
+
- |
+
- |
沙门氏菌属靛基质阳性变种(要求血清学鉴定结果)
爱德华氏菌属 |
赖氨酸
|
鸟氨酸
|
onpg
|
水杨苷
|
棉子糖
|
动力
|
判定结果
|
+
- - d |
+
- + d |
-
- + d |
-
- - d |
-
- - d |
+
- - d |
沙门氏菌属
志贺氏菌属 宋内氏志贺氏菌 埃希氏菌属 |
项目
|
Ⅰ
|
Ⅱ
|
Ⅲ
|
Ⅳ
|
Ⅴ
|
Ⅵ
|
卫矛醇
山梨醇 水杨苷 onpg 丙二酸盐 kcn |
+
+ - - - - |
+
+ - - + - |
-
+ - + + - |
-
+ + - - + |
+
+ - + - + |
-
- - - - - |
菌 名
|
原 名
|
O抗原
|
h抗原
|
|
第1相
|
第2相
|
|
|
|
a 群
|
|
|
|
|
甲型副伤寒沙门氏菌
|
s.paratyphi a
|
1,2,12
|
a
|
[1,5]
|
b 群
|
|
|
|
|
基桑加尼沙门氏菌
|
s.kisangani
|
1,4,[5],12
|
a
|
1,2
|
阿雷查瓦莱塔沙门氏菌
|
s.arechavaleta
|
4,[5],12
|
a
|
[1,7]
|
马流产沙门氏菌
|
s.abortus equi
|
4,12
|
-
|
e,n,x
|
乙型副伤寒沙门氏菌
|
s.paratyphi
|
1,4,[5],12
|
b
|
1,2
|
利密特沙门氏菌
|
b s.limete
|
1,4,12,27
|
b
|
1,5
|
阿邦尼沙门氏菌
|
s.abony
|
1,4,[5],12,27
|
b
|
e,n,x
|
维也纳沙门氏菌
|
s.wien
|
1,4,12,27
|
b
|
l,w
|
伯里沙门氏菌
|
s.bury
|
4,12,27
|
c
|
z6
|
斯坦利沙门氏菌
|
s.stanley
|
1,4,[5],12,27
|
d
|
1,2
|
圣保罗沙门氏菌
|
s.saint paul
|
1,4,[5],12
|
e,h
|
1,2
|
里定沙门氏菌
|
s.reading
|
1,4,[5],12
|
e,h
|
1,5
|
彻斯特沙门氏菌
|
s.chester
|
1,4,[5],12
|
e,h
|
e,n,x
|
德尔卑沙门氏菌
|
s.derby
|
1,4,[5],12
|
f,g
|
[1,2]
|
阿贡纳沙门氏菌
|
s.agona
|
1,4,12
|
f,g,s
|
-
|
埃森沙门氏菌
|
s.essen
|
4,12
|
g,m
|
-
|
加利福尼亚沙门氏菌
|
s.california
|
4,12
|
g,m,t
|
-
|
金斯敦沙门氏菌
|
s.kingston
|
1,4,[5],12,27
|
g,s,t
|
[1,2]
|
布达佩斯沙门氏菌
|
s.budapest
|
1,4,12,27
|
g,t
|
-
|
鼠伤寒沙门氏菌
|
s.typhimurium
|
1,4,[5],12
|
i
|
1,2
|
拉古什沙门氏菌
|
s.lagos
|
1,4,[5],12
|
i
|
1,5
|
布雷登尼沙门氏菌
|
s.bredeney
|
1,4,12,27
|
l,v
|
1,7
|
基尔瓦沙门氏菌Ⅱ
|
s.kilwa Ⅱ
|
4,12
|
l,w
|
e,n,x
|
海德尔堡沙门氏菌
|
s.heidelberg
|
1,4,[5],12
|
r
|
1,2
|
印地安纳沙门氏菌
|
s.indiana
|
1,4,12
|
z
|
1,7
|
斯坦利维尔沙门氏菌
|
s.stanleyville
|
1,4,[5],12,27
|
z4,z28
|
[1,2]
|
伊图里沙门氏菌
|
s.ituri
|
1,4,12
|
z10
|
1,5
|
c1 群
|
|
|
|
|
奥斯陆沙门氏菌 |
s.oslo
|
6,7
|
a
|
e,n,x
|
爱丁堡沙门氏菌
|
s.edinburg
|
6,7
|
b
|
1,5
|
布隆方丹沙门氏菌Ⅱ
|
s.bloemfonteinⅡ
|
6,7
|
b
|
[e,n,x]:z42
|
丙型副伤寒沙门氏菌
|
s.paratyphi c
|
6,7[vi]
|
c
|
1,5
|
猪霍乱沙门氏菌
|
s.cholerae suis
|
6,7
|
[c]
|
1,5
|
猪伤寒沙门氏菌
|
s.typhi suis
|
6,7
|
c
|
1,5
|
罗米他沙门氏菌
|
s.lomita
|
6,7
|
e,h
|
1,5
|
布伦登卢普沙门氏菌
|
s.braenderup
|
6,7
|
e,h
|
e,n,z15
|
里森沙门氏菌
|
s.rissen
|
6,7
|
f,g
|
-
|
蒙得维的亚沙门氏菌
|
s.montevideo
|
6,7
|
g,m,[p],s
|
[1,2,7]
|
里吉尔沙门氏菌
|
s.riggil
|
6,7
|
g,t
|
-
|
奥雷宁堡沙门氏菌
|
s.oranienburg
|
6,7
|
m,t
|
-
|
奥里塔蔓林沙门氏菌
|
s.oritamerin
|
6,7
|
i
|
1,5
|
汤卜逊沙门氏菌
|
s.thompson
|
6,7
|
k
|
1,5
|
康科德沙门氏菌
|
s.concord
|
6,7
|
l,v
|
1,2
|
伊鲁木沙门氏菌
|
s.irumu
|
6,7
|
l,v
|
1,5
|
姆卡巴沙门氏菌
|
s.mkamba
|
6,7
|
l,v
|
1,6
|
波恩沙门氏菌
|
s.bonn
|
6,7
|
l,v
|
e,n,x
|
波茨坦沙门氏菌
|
s.potsdam
|
6,7
|
l,v
|
e,n,z15
|
格但斯克沙门氏菌
|
s.gdansk
|
6,7
|
l,v
|
z6
|
维尔肖沙门氏菌
|
s.virchow
|
6,7
|
r
|
1,2
|
婴儿沙门氏菌
|
s.infantis
|
6,7
|
r
|
1,5
|
巴布亚沙门氏菌
|
s.papuana
|
6,7
|
r
|
e,n,z15
|
巴累利沙门氏菌
|
s.bareilly
|
6,7
|
y
|
1,5
|
哈特福德沙门氏菌
|
s.hartford
|
6,7
|
y
|
e,n,x
|
三河岛沙门氏菌
|
s.mikawasima
|
6,7
|
y
|
e,n,z15
|
姆班达卡沙门氏菌
|
s.mbandaka
|
6,7
|
z10
|
e,n,z15
|
田纳西沙门氏菌
|
s.tennessee
|
6,7
|
z29
|
-
|
c2 群
|
|
|
|
|
习志野沙门氏菌
|
s.narashino
|
6,8
|
a
|
e,n,x
|
名古屋沙门氏菌
|
s.nagoya
|
6,8
|
b
|
1.5
|
加瓦尼沙门氏菌
|
s.gatuni
|
6,8
|
b
|
e,n,x
|
慕尼黑沙门氏菌
|
s.muenchen
|
6,8
|
d
|
1,2
|
蔓哈顿沙门氏菌
|
s.manhattan
|
6,8
|
d
|
1,5
|
纽波特沙门氏菌
|
s.newport
|
6,8
|
e,h
|
1,2
|
科特布斯沙门氏菌
|
s.kottbus
|
6,8
|
e,h
|
1,5
|
茨昂威沙门氏菌
|
s.tshiongwe
|
6,8
|
e,h
|
e,n,z15
|
林登堡沙门氏菌
|
s.lindenburg
|
6,8
|
i
|
1,2
|
塔科拉迪沙门氏菌
|
s.takoradi
|
6,8
|
i
|
1,5
|
波那雷恩沙门氏菌
|
s.bonariensis
|
6,8
|
i
|
e,n,x
|
利剂菲尔德沙门氏菌
|
s.litchfield
|
6,8
|
l,v
|
1,2
|
病牛沙门氏菌
|
s.bovismorbif-cans
|
6,8
|
r
|
1,5
|
查理沙门氏菌
|
s.chailey
|
6,8
|
z4,z23
|
e,n,z15
|
c3 群
|
|
|
|
|
巴尔多沙门氏菌
|
s.bardo
|
8
|
e,h
|
1,2
|
依麦克沙门氏菌
|
s.emek
|
8,20
|
g,m,s
|
-
|
肯塔基沙门氏菌
|
s.kentucky
|
8,20
|
i
|
z6
|
c4 群
|
|
|
|
|
布伦登卢普沙门氏菌
|
s.braenderup
|
6,7,14
|
e,h
|
e,n,z15
|
14+变种
|
var.14+
|
|
|
|
耶路撒冷沙门氏菌
|
s.jerusalem
|
6,7,[14]
|
z10
|
l,w
|
d 群
|
|
|
|
|
仙台沙门氏菌
|
s.sendai
|
1,9,12
|
a
|
1,5
|
伤寒沙门氏菌
|
s.typhi
|
9,12,vi
|
d
|
-
|
塔西沙门氏菌
|
s.tarshyne
|
9,12
|
d
|
1,6
|
伊斯特本沙门氏菌
|
s.eastbourne
|
1,9,12
|
e,h
|
1,5
|
以色列沙门氏菌
|
s.israel
|
9,12
|
e,h
|
e,n,z15
|
肠炎沙门氏菌
|
s.enteritidis
|
1,9,12
|
g,m
|
[1,7]
|
布利丹沙门氏菌
|
s.blegdam
|
9,12
|
g,m,q
|
-
|
沙门氏菌Ⅱ
|
salmonella Ⅱ
|
1,9,12
|
g,m,,t
|
[1,5]:[z42]
|
都柏林沙门氏菌
|
s.dublin
|
1,9,12[vi]
|
g,p
|
-
|
芙蓉沙门氏菌
|
s.seremban
|
9,12
|
i
|
1,5
|
巴拿马沙门氏菌
|
s.panama
|
1,9,12
|
l,v
|
1,5
|
戈丁根沙门氏菌
|
s.goettingen
|
9,12
|
l,v
|
e,n,z15
|
爪哇安纳沙门氏菌
|
s.javiana
|
1,9,12
|
l,z28
|
1,5
|
鸡-雏沙门氏菌
|
s.gallinarum-pullorum
|
1,9,12
|
-
|
-
|
e1 群
|
|
|
|
|
奥凯福科沙门氏菌
|
s.okejoko
|
3,10
|
c
|
z6
|
瓦伊勒沙门氏菌
|
s.vejle
|
3,10
|
e,h
|
1,2
|
明斯特沙门氏菌
|
s.muenster
|
3,10
|
e,h
|
1,5
|
鸭沙门氏菌
|
s.anatum
|
3,10
|
e,h
|
1,6
|
纽兰沙门氏菌
|
s.newlands
|
3,10
|
e,h
|
e,n,x
|
火鸡沙门氏菌
|
s.meleagridis
|
3,10
|
e,h
|
l,w
|
雷根特沙门氏菌
|
s.regent
|
3,10
|
f,g,
|
[1,6]
|
西翰普顿沙门氏菌
|
s.westhampton
|
3,10
|
g,s,t
|
|
阿姆德尔尼斯沙门氏菌
|
s.amounderness
|
3,10
|
i
|
1,5
|
新罗歇尔沙门氏菌
|
s.new-rochelle
|
3,10
|
k
|
l,w
|
恩昌加沙门氏菌
|
s.nchanga
|
3,10
|
l,v
|
1,2
|
新斯托夫沙门氏菌
|
s.sinstorf
|
3,10
|
l,v
|
1,5
|
伦敦沙门氏菌
|
s.london
|
3,10
|
l,v
|
1,6
|
吉韦沙门氏菌
|
s.give
|
3,10
|
l,v
|
1,7
|
鲁齐齐沙门氏菌
|
s.ruzizi
|
3,10
|
l,v
|
e,n,z15
|
乌干达沙门氏菌
|
s.uganda
|
3,10
|
l,z13
|
1,5
|
乌盖利沙门氏菌
|
s.ughelli
|
3,10
|
r
|
1,5
|
韦太夫雷登沙门氏菌
|
s.weltevreden
|
3,10
|
r
|
z6
|
克勒肯威尔沙门氏菌
|
s.clerkenwell
|
3,10
|
z
|
l,w
|
列克星敦沙门氏菌
|
s.lexington
|
3,10
|
z10
|
1,5
|
e2 群
|
|
|
|
|
纽因吞沙门氏菌
|
s.newington
|
3,15
|
e,h
|
1,6
|
剑桥沙门氏菌
|
s.cambridge
|
3,15
|
e,h
|
l,w
|
哈姆斯塔德沙门氏菌
|
s.halmstad
|
3,15
|
g,s,t
|
-
|
朴次茅斯沙门氏菌
|
s.portsmouth
|
3,15
|
l,v
|
1,6
|
e4 群
|
|
|
|
|
萨奥沙门氏菌
|
s.sao
|
1,3,19
|
e,h
|
e,n,z15
|
卡拉巴尔沙门氏菌
|
s.calabar
|
1,3,19
|
e,h
|
l,w
|
山夫登堡沙门氏菌
|
s.senftenberg
|
1,3,19
|
e,,t
|
-
|
斯特拉特福沙门氏菌
|
s.stratford
|
1,3,19
|
i
|
1,2
|
塔克松尼沙门氏菌
|
s.taksony
|
1,3,19
|
i
|
z6
|
索恩堡沙门氏菌
|
s.schoeneberg
|
1,3,19
|
z
|
e,n,z15
|
f 群
|
|
|
|
|
昌丹斯沙门氏菌
|
s.chandans
|
11
|
d
|
e,n,x
|
阿柏丁沙门氏菌
|
s.aberdeen
|
11
|
i
|
1,2
|
布里赫姆沙门氏菌
|
s.brijbhumi
|
11
|
i
|
1,5
|
威尼斯沙门氏菌
|
s.veneziana
|
11
|
i
|
e,n,x
|
阿巴特图巴沙门氏菌
|
s.abaetetuba
|
11
|
k
|
1,5
|
鲁比斯劳沙门氏菌
|
s.rubislaw
|
11
|
r
|
e,n,x
|
其 他 群
|
|
|
|
|
浦那沙门氏菌
|
s.poona
|
1,13,22
|
z
|
1,6,[z59]
|
里特沙门氏菌
|
s.ried
|
1,13,22
|
z4,z23
|
-
|
亚特兰大沙门氏菌
|
s.atlanta
|
13,23
|
b
|
-
|
密西西比沙门氏菌
|
s.mississippi
|
1,13,23
|
b
|
1,5
|
古巴沙门氏菌
|
s.cubana
|
1,13,23
|
z29
|
[z37]
|
苏拉特沙门氏菌
|
s.surat
|
[1],6,14,[25]
|
[r],i
|
e,n,z15
|
松兹瓦尔沙门氏菌
|
s.sundsvall
|
1,6,14,25
|
z
|
e,n,x
|
非丁伏斯沙门氏菌
|
s.hvittingfoss
|
16
|
b
|
e,n,x
|
威斯敦沙门氏菌
|
s.weston
|
16
|
e,h
|
z6
|
上海沙门氏菌
|
s.shanghai
|
16
|
l,v
|
1,6
|
自贡沙门氏菌
|
s.zigong
|
16
|
l,w
|
1,5
|
巴圭达沙门氏菌
|
s.baguida
|
21
|
z4,z23
|
-
|
迪尤波尔沙门氏菌
|
s.dieuppeul
|
28
|
i
|
1,7
|
卢肯瓦尔德沙门氏菌
|
s.luckenwalde
|
28
|
z10
|
e,n,z15
|
拉马特根沙门氏菌
|
s.ramatgan
|
30
|
k
|
1,5
|
阿德莱沙门氏菌
|
s.adelaide
|
35
|
f,g
|
-
|
旺兹沃思沙门氏菌
|
s.wandsworth
|
39
|
b
|
1,2
|
雷俄格伦德沙门氏菌
|
s.riogrande
|
40
|
b
|
1,5
|
莱瑟沙门氏菌 Ⅱ
|
s.lethe Ⅱ
|
41
|
g,t
|
-
|
达莱姆沙门氏菌
|
s.dahlem
|
48
|
k
|
e,n,z15
|
沙门氏菌Ⅲ
|
salmonella Ⅲ
|
61
|
l,v
|
1,5,7:[z57]
|
三、培养基
(一)缓冲蛋白胨水
成分:蛋白胨 10g
氯化钠 5g
磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O) 9g
磷酸二氢钾 1.5g
蒸馏水 1000mL
pH7.2
按上述成分配好后,装入大烧瓶,121℃高压灭菌,临用时无菌分装每瓶225mL,供沙门氏菌前增菌用。
(二)氯化镁孔雀绿(MM)增菌液
成分:甲液:胰蛋白胨 5g
氯化钠 8g
磷酸二氢钾 1.6g
蒸馏水 1000mL
乙液:氯化镁(化学纯) 40g
蒸馏水 100mL
丙液:0.4%孔雀绿水溶液
制法:分别按上述成分配好,121℃高压灭菌15min备用,临用时取甲液90mL,乙液9mL,丙液0.9mL,以无菌操作混合即可。
(三)四硫磺酸钠煌绿(TTB)增菌液
成分:多胨或月示胨 5g
胆盐 1g
碳酸钙 10g
硫代硫酸钠 30g
蒸馏水 1 000mL
制法:将上述各成分加入蒸馏水,加热溶解,分装每瓶100mL中加入碘溶液2mL,0.1%煌绿溶液1mL。
碘溶液配制:碘6g,碘化钾5g,蒸馏水20mL。
(四)亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液
成分:蛋白胨 5g
乳糖 4g
亚硒酸氢钠 4g
磷酸氢二钠 5.5g
磷酸二氢钾 4.5g
L-胱氨酸 0.01g
蒸馏水 1 000mL
制法:将除亚硒酸氢钠和L-胱氨酸以外的各成分溶解于900mL蒸馏水中,加热煮沸,俟冷备用,另将亚硒酸氢钠溶解于100mL蒸馏水中,加热煮沸,俟冷,以无菌操作与上液混合。再加入1%L~胱氨酸~氢氧化钠溶液1mL。分装于灭菌瓶中,每瓶100mL,pH应为7.0±0.1。
1%L-胱氨酸-氢氧化钠溶液的配法:称取L-胱氨酸0.1g(或DL-胱氨酸0.2g),加1N氢氧化钠1.5mL,使溶解,再加入蒸馏水8.5mL即成。
(五)亚硫酸铋琼脂(BS)
成分:蛋白胨 10g
牛肉膏 5g
葡萄糖 5g
硫酸亚铁 0.3g
磷酸氢二钠 4g
煌绿 0.025g
柠檬酸铋铵 2g
亚硫酸钠 6g
琼脂 18~20g
蒸馏水 1000mL
pH7.5
制法:将前5种成分溶解于300mL蒸馏水中,将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠另用50mL蒸馏水溶解,将琼脂于600mL蒸馏水中煮沸溶解,冷至80℃,将以上三液合并,补充蒸馏水至1000mL,校正pH,加0.5%煌绿水溶液5mL摇匀,冷至50~55℃倾注平板。
注:此培养基不需高压灭菌,制备过程中不宜过分加热,以免降低其选择性,应在临用前一天制备,贮存于室温暗处,超过48h,不宜使用。
(六)DHL琼脂(Deoxycholate Hydrogen Sulfide Lactose Agar)
成分:蛋白胨 20g
牛肉膏 3g
乳糖 10g
蔗糖 10g
去氧胆酸钠 1g
硫代硫酸钠 2.3g
柠檬酸钠 1g
柠檬酸铁铵 1g
中性红 0.03g
琼脂 18~20g
蒸馏水 1000mL
制法:除中性红和琼脂以外的成分溶解于400mL蒸馏水中,校正pH为7.3,再将琼脂于600mL蒸馏水中煮沸溶解,两液合并,加入0.5%中性红水溶液6mL,待冷至50~55℃倾注平板。
(七)HE琼脂(Hektoen Enteric Agar)
成分:月示胨 12g
牛肉膏 3g
乳糖 12g
蔗糖 12g
水杨素 2g
胆盐 20g
氯化钠 5g
琼脂 18~20g
蒸馏水 1000mL
0.4%溴麝香草酚蓝溶液 16mL
Andrade指示剂 20mL
甲液 20mL
乙液 20mL
pH7.5
制法:将前7种成分溶解于400mL蒸馏水内为基础液,将琼脂加入于60mL蒸馏水内,加热溶解,加入甲液和乙液于基础液内,校正pH,再加入指示剂,并与琼脂合并,待冷至50~55℃倾注平板。
注:①此培养基不可高压灭菌。
②甲液的配制:
硫代硫酸钠 34g
柠檬酸铁铵 4g
蒸馏水 100mL
③乙液的配制:
去氧胆酸钠 10g
蒸馏水 100mL
④Andrade指示剂:
酸性复红 0.5g
1N氢氧化钠溶液 16mL
蒸馏水 100mL
将复红溶解于蒸馏水中,加入氢氧化钠溶液,数小时后中复红褪色不全,再加氢氧化钠溶液1~2mL。
(八)SS琼脂
1. 基础培养基
成分:牛肉膏 5g
月示胨 5g
三号胆盐 3.5g
琼脂 17g
蒸馏水 1000mL
制法:将牛肉膏、月示 胨和胆盐溶解于400mL蒸馏水中,将琼脂加入于600mL蒸馏水中,煮沸,使其溶解,再将两液混合,121℃高压灭菌15min,保存备用。
2. 完全培养基
成分:基础培养基 1000mL
乳糖 10g
柠檬酸钠 8.5g
硫代硫酸钠 8.5g
10%柠檬酸铁溶液 10mL
1%中性红溶液 2.5mL
0.1%煌绿溶液 0.33mL
制法:加热溶化基础培养基,按比例加入上述染料以外的各成分,充分混合均匀,校正pH至7.0,加入中性红和煌绿溶液,倾注平板。
注:① 制好的培养基宜当日使用,或保存冰箱内于48h内使用。
② 煌绿溶液配好后应在10d以内使用。
③ 可以购用SS琼脂的干燥培养基。
(九)三糖铁琼脂
成分:蛋白胨: 20g
牛肉膏 5g
乳糖 10g
蔗糖 10g
葡萄糖 1g
氯化钠 5g
硫酸亚铁铵[Fe(NH4)2(SO4)2·6H2O]0.2g
硫代硫酸钠 0.2g
琼脂 12g
酚红 0.025g
蒸馏水 1000mL
pH7.4
制法:将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中,校正pH,加入琼脂煮沸溶化,加入0.2%酚红水溶液12.5mL,摇匀,分装试管,121℃高压灭菌15min,放置高层斜面备用。
(十)蛋白胨水(靛基质试验用)
万分:蛋白胨(或胰蛋白胨) 20g
氯化钠 5g
蒸馏水 1000mL
pH7.4
制法:按上述成分配制,分装小试管,121℃高压灭菌15min。
靛基质试剂:
柯凡克试剂:将5g对二甲氨基苯甲醛溶于75mL戊醇中,然后缓慢加入浓盐酸25mL。
欧-波试剂:将1g对二甲氨基苯甲醛溶解于95mL95%酒精内,然后缓慢加入浓盐酸20mL。
试验方法:接种培养物36±1℃培养1~2d,加柯凡克试剂约0.5mL,轻摇试管,阳性者于试剂层呈深红色。或加欧-波试剂约0.5mL,沿管壁下覆盖于培养基表面,阳性者于液面接触处呈玫瑰红色。
注:蛋白胨中应含有丰富的色氨酸,每批蛋白胨应先用已知菌种鉴定后方可使用。
(十一)尿素琼脂(pH7.2)
成分:蛋白胨 1g
氯化钠 5g
葡萄糖 1g
磷酸二氢钾 2g
0.4%酚红溶液 3mL
琼脂 20g
蒸馏水 1000mL
20%尿素溶液 100mL
pH7.2
制法:将除尿素和琼脂以外的成分配好,校正pH,加入琼脂煮沸溶化,分装烧瓶,121℃高压灭菌15min,冷至50~55℃加入经除菌过滤的尿素溶液,分装于灭菌试管内,放成斜面备用。
试验方法:接种培养物36±1℃培养24h,观察结果,尿素酶阳性者,由于产碱而使培养基变为红色。
(十二)氰化钾(KCN)培养基
成分:蛋白胨 10g
氯化钠 5g
磷酸二氢钾 0.225g
磷酸氢二钠 5.64g
蒸馏水 1000mL
0.5%氰化钾溶液 20mL
pH7.6
制法:将除氰化钾以外的成分配好,分装烧瓶,121℃高压灭菌15min,放在冰箱内使用其充分冷却,每100mL培养基加入0.5%氰化钾溶液2mL(最后浓度为1:10000),分装灭菌试管,每管约4mL,立刻用灭菌橡皮塞塞紧,放4℃冰箱保存,同时将不加氰化钾的培养基作为对照培养基,分装试管备用。
(十三)氨基酸脱羧酶试验培养基
成分:蛋白胨 5g
酵母浸膏 3g
葡萄糖 1g
蒸馏水 1000mL
1.6%溴甲酚紫乙醇溶液 1mL
L-氨基酸或DL氨基酸 0.5或1g/100mL
制法:除氨基酸以外的成分加热溶解后,分装每瓶100mL,分别加入各种氨基酸:赖氨酸、精氨酸和鸟氨酸。L-氨基酸按0.5%加入,DL-氨基酸按1%加入,校正pH至6.8,对照培养基不加氨基酸,分装于灭菌的小试管内,每管0.5mL,上面加一层液体石蜡,115℃高压灭菌10min。
试验方法:接种培养物于36±1℃培养18~24h,观察结果,氨基酸脱羧酶阳性者,由于产碱培养基应呈绿色,阴性者无碱性产物,但因葡萄糖产酸而使培养基变为黄色,对照管应为黄色。
(十四)糖发酵管
成分:牛肉膏 5g
蛋白胨 10g
氯化钠 3g
磷酸氢二钠 2g
0.2%溴麝香草酚蓝溶液 12mL
蒸馏水 1000mL
pH7.4
制法:葡萄糖发酵管按上述成分配好后,按0.5%加入葡萄糖,分装于有倒管的试管内,121℃高压灭菌15min。其他各种糖发酵管,可按上述成分配好后分装好后分装每瓶100mL,121℃高压灭菌15min,另将各种糖类分别配成10%溶液,同时高压灭菌,将5mL糖溶液加入于100mL培养基内,以无菌操作分装小试管。
注:蔗糖不纯,加热后会自行水解者,应采用过滤法除菌。
(十五)ONPG培养基
成分:邻硝基酚β-D半乳糖苷(O~nitrophenyl
β-D-galactopyranoside ONPG) 60mg
0.01mol/L磷酸钠缓冲液(pH7.5) 10mL
1%蛋白胨水(pH7.5) 30mL
制法:将ONPG溶于缓冲液内,加入蛋白胨水,以过滤法除菌,分装试管,每管0.5mL,用橡皮塞塞紧。
试验方法:由琼脂斜面上挑取培养物1满环接种,于36±1℃培养1-3h或24h观察结果,如果β-半乳糖苷酶产生,由于1-3h变黄色,如无此酶则24h不变色。
(十六)半固体琼脂
成分:蛋白胨 1g
牛肉膏 0.3g
氯化钠 0.5g
琼脂 0.35~0.4g
蒸馏水 100mL
制法:按上述成分配好,煮沸溶解,校pH为7.4,分装小试管,121℃高压灭菌15min,直立疑固备用。
(十七)缓冲葡萄糖蛋白胨水(MR和V-P试验用)
成分:磷酸氢二钾 5g
多胨 7g
葡萄糖 5g
蒸馏水 1000mL
pH7.0
制法:溶化后校正pH,分装试管,每管1~2mL,121℃高压灭菌15min。
甲基红试验:接种培养物于36±1℃培养2~4天,滴加试剂一滴,立即观察结果,鲜红色为阳性,黄色为阴性。
甲基红试剂配法:10mg甲基红溶于30mL乙醇中,然后加入20mL蒸馏水。
V-P试验:接种培养物于36±1℃培养2~4天,加入6%α-萘酚酒精溶液0.5mL和40%氢氧化钾溶液0.2mL,充分振摇观察结果,阳性者立刻或数分钟呈红色,如阴性时应于36℃培养4h再进行观察。
(十八)丙二酸钠培养基
成分:酵母膏 1g
硫酸铵 2g
磷酸氢二钾 0.6g
磷酸二氢钾 0.4g
氯化钠 2g
丙二酸钠 3g
0.2%溴麝香草酚蓝溶液 12mL
蒸馏水 1000mL
pH6.8
制法:先将酵母浸膏和盐类溶解于水,校正pH后再加指示剂,分装试管,121℃高压灭菌15min。
接种培养物于36±1℃培养48h,阳性者由绿色变为蓝色。
(十九)氧化酶试验
1%盐酸二甲基对苯二胺溶液:小量新鲜配制,于冰箱内避光保存。
1%α-萘酚乙醇溶液。
试验方法:取白色洁净滤纸沾取菌落,加盐酸二甲基对苯二胺溶液一滴,阳性者呈现粉红色,并逐渐加深,再加α-萘酚溶液一滴,阳性者于半分钟内呈现鲜蓝色,阴性于2min内不变。
以毛细吸管吸取试剂,直接滴加于菌落上,其显色反应与以上相同。
(二十)WS琼脂
成分:
月示胨 12g
牛肉膏 3g
氯化钠 5g
乳糖 12g
蔗糖 12g
十二烷基硫酸钠 2g
琼脂 15g
Andrade指示剂 20mL
0.4%溴麝香草酚蓝溶液 16mL
甲液 20mL
蒸馏水 1000mL
pH7.0
制法:
除指示剂和甲液外,将其他成分加热溶解,不需消毒,校正pH后加入指示剂和甲液,倾注平板,应呈草绿色。
注:①供沙门氏菌分离用。
②Andrade指示剂和甲液的配制均见HE琼脂。
序号
|
噬菌体裂解模式
|
判定结果
|
||||||
O-1
|
c
|
sh
|
e
|
ce
|
e-4
|
ent
|
||
1
2 3 4 5 6 7 8 0 |
cl
cl - - · - - - - |
-
- cl - - - - (-) - |
-
- - cl - - - · - |
-
- - · cl - - - - |
-
- (-) · · cl · - - |
-
cl (-) · · - cl - - |
-
- - - - - - cl - |
沙门氏菌属
沙门氏菌属(靛基质一) 大肠埃希氏菌(靛基质十) 弗劳地氏柠檬酸杆菌 志贺氏菌属,大肠埃希氏菌 大肠埃希氏菌 弗劳地氏柠檬酸杆菌,大肠埃希氏菌 大肠埃希氏菌 阴沟肠杆菌 噬菌体阴性菌株(用生化试验方法鉴定) |